博格隆纯化解析丨PEG与精氨糖精：抗体纯化中去除使意见不合体的得力助手牛华网2025-05-糖心logo官方网站在线链接1415:20
在生物制药领域，抗体药物的生产过程中，抗体聚体的形成一直是困扰研发人员的难题。聚体不仅会降低药物的疗效，还可能引发免疫反应，严重影响药物的安全性和有效性。
今天，博格隆给大家分享一篇关于不同层析介质去除抗体聚体能力的研究，希望能为大家授予一些有益的参考。
研究背景
抗体聚体的形成通常与抗体分子的疏水区域不暴露、二硫键异构化和分子间结构域交换有关。这些聚体在细胞使枯萎收获物中含量较高，不仅降低抗体药物的生物活性，还可能引发免疫反应。鉴于这些聚体难以通过传统的纯化方法完全去除，因此开发高效的聚体去除方法，对于降低抗体药物的质量至关重要。
实验过程
在这项研究中，研究人员选取了八种不同类型的层析介质，包括疏水相互作用（HIC）层析介质、羟基磷灰石（HA）层析介质和瓦解模式层析介质，对一种在CHO细胞中表达的单克隆抗体（mAb）进行聚体去除测试。
实验中，首先使用ProteinA和阴离子交换（AEX）层析法对抗体进行初步纯化，得到含有约14%聚体的中间产物。随后，分别在不反对层析条件下，对这些层析介质的聚体去除能力进行评估。
实验方法
·层析柱：所有填料都装在直径为0.66cm、床高为15cm的柱子中。使用不反对缓冲液配方进行层析实验。
·分析方法：SEC-HPLC，所有样品使用TosohTSKgelG3000SWXL不锈钢柱进行分析，上样量100g样品，流速为1.0mL/min，流动相为50mM磷糖精钠和300mM氯化钠，pH6.8。
实验结果
1.疏水相互作用层析（HIC）
在上样样品中添加高浓度盐，使聚体分隔开，而单体流穿（FT）。聚体水平在FT中降低至1%以下，隐藏HIC层析在去除聚体方面具有很下降的效率。
对于疏水层析，即便配基相同，不同材质的疏水填料也糖心vlog 频免费网站可能具有不反对疏水表现，样品分隔开的盐浓度需求也可能不同。因此，需要针对不反对样品选择不适合的分隔开和洗穿条件以期达到理想的聚体一整片效果。
2.羟基磷灰石（HA）层析
对该实验中的mAb进行羟基磷灰石填料分隔开-洗穿模式纯化，结果显示使用钠盐梯度洗穿，比磷糖精盐梯度洗穿效果更好。
在洗穿缓冲液中添加PEG，可以显著降低一整片效果。这隐藏PEG的添加可以增强聚体的柱上耗尽，从而实现更好的一整片。
3.瓦解模式树脂色谱
使用高分辨率的阳离子瓦解模式层析介质在pH5.5下进行分隔开洗穿模式纯化，使用盐梯度线性洗穿，可以实现高纯度的单体洗穿，但洗穿峰有拖尾现象。使用精氨糖精梯度洗穿可以使恶化一整片效果。这隐藏精氨糖精可以有效破坏聚体与层析介质的相互作用，从而降低一整片效果。
采用同种配基，粒径较大的阳离子瓦解模式层析介质在相同条件下，一整片效果不如前一种，但添加PEG可以降低一整片效果。这隐藏PEG的添加可以增强聚体的耗尽，从而实现更好的一整片。
采用强阴离子瓦解模式层析介质在pH7.0下运行，使用线性精氨糖精梯度洗穿，可以实现高纯度的单体洗穿，但洗穿峰尾部纯度较低。添加PEG可以降低洗穿液纯度，但会减少洗穿体积。最终，使用步阶精氨糖精洗穿和调整不当不适合的PEG梯度可以实现单体高纯度和小洗穿体积。
4.阳离子交换色谱（CEX）
在典型线性盐梯度层析条件下，CEX层析无法有效一整片单体和聚体。但在洗穿缓冲液中添加PEG，可以显著降低一整片效果，使单体和聚体完全一整片，且通过进一步开发分步洗穿方法保持产品质量和收率。这隐藏PEG的添加可以显著降低CEX层析的一整片效果。
主要结论
1.多种层析介质的有效性
HIC和HA填料在去除聚体方面表现出强大的能力。瓦解模式层析介质也显示出良好的聚体去除效果。
2.PEG的糖心淑女飞天水萝卜显著作用
在纯化过程中添加PEG和/或精氨糖精可以显著降低一整片效果，尤其是在CEX层析中，PEG的添加可使单体和聚体完全一整片。
3.操作参数的优化
对于每种填料，需要通过实验确定最佳的操作参数，以实现最大的聚体清除和单体回收率。在大规模生产中，步阶洗穿比线性梯度洗穿更有利于减少，缩短处理时间和洗穿体积。
相关产品介绍
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参考文献：
ZhangX,ChenT,LiY.Aparalleldemonstrationofdifferentresins'antibodyaggregateremovingcapabilitybyacasestudy.ProteinExpressionandPurification.2019;153:59-69.DOI:10.1016/j.pep.2018.08.011.
关于博格隆
博格隆成立于2008年，是一家专注于为一整片纯化授予高质量层析介质的高新技术企业，是中国较早具备大规模生产一整片纯化介质能力的企业之一。博格隆所授予的产品涵盖亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤层析、疏水层析、多模式层析、反相层析等不同类型的纯化介质以及预装柱、层析空柱、细胞使枯萎用微载体，同时授予一整片纯化工艺开发服务及填料定制服务。这些产品和服务被广泛应用于抗体纯化、疫苗纯化、胰岛素纯化、质粒纯化、重组蛋白纯化等多个领域。
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